Uvod u proizvod
|
Naziv proizvoda |
Cat. br. |
Spec. |
|
IP lizni bafer |
G{0}}ML |
100 mL |
Opis proizvoda/Uvod
IP pufer za lizu je lizat koji lizira ćelije ili tkiva za pripremu uzoraka proteina u uslovima bez denaturacije. Uzorci proteina dobijeni iz lize tkiva ili ćelija sa ovim lizatom mogu se primeniti na PAGE, western blot i imunoprecipitaciju (IP), ko-imunoprecipitaciju (co-IP), imunoprecipitaciju hromatina (ChIP) i ELISA gde je potrebna aktivnost proteina.
Ovaj proizvod se sastoji od 25 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA i 1% NP-40 može se primijeniti na životinjsko ili biljno tkivo i uzorke ćelija, kao i na uzorke gljivica ili bakterija.
Uslovi skladištenja i otpreme
Isporuka sa mokrim ledom; Čuvati dalje od svjetlosti na 2-8 stepeni, vrijedi 12 mjeseci.
Komponente proizvoda
|
Komponenta |
G{0}}ML |
|
IP lizni bafer |
100 mL |
|
Manual |
|
Protokol/procedure analize
Zahtijeva samoobavljanje inhibitora proteaze. Inhibitore proteaze (G2006, G2007, G2008, itd.) treba dodati IP lizatu prije upotrebe kako bi se spriječila degradacija proteina. Sve reference na IP lizate u sljedećim uputstvima su dodane s inhibitorima proteaze.
Za uzorke tkiva:
1. Blokovi tkiva se peru prethodno ohlađenim PBS-om (preporučuje se G4202) kako bi se uklonile mrlje od krvi, a zatim se izrezuju na male komadiće i stavljaju u homogenizator.
2. Dodajte 10 puta zapreminu tkiva IP liznog pufera i homogenizirajte na niskoj temperaturi (Preporučuje se korištenje brzog instrumenta za mljevenje tkiva KZ-III-F i KZ-III-FP, koji je samostalno razvio i proizvodi Servicebio). Imajte na umu da se količina IP liznog pufera može dodati u omjeru od približno 50 mg tkiva prema 1 mL lizata. Ako je sadržaj proteina u tkivu nizak, količina lizata se može smanjiti kako bi se povećala koncentracija proteina u otopini sirovog ekstrakta.
3. Prebacite homogenat u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL i protresite. Ledena kupka u trajanju od 30 minuta sa ponovljenim pipetiranjem svakih 10 minuta kako bi se osigurala potpuna liza ćelija tkiva;
4. Centrifugirajte na 12000 xg 5 minuta i sakupite supernatant, kao ukupni rastvor proteina.
Za uzorke adherentnih ćelija:
1. Isperite ćelije sa PBS-om 2-3 puta, a zadnji put temeljito aspirirajte zaostalu tečnost.
2. Apsorbirajte IP pufer za lizu u ploču sa ćelijskom kulturom i u tikvicu u omjeru od 250 μL lizata po jažici 6- ploče s jažicom, protresite ploču za kulturu i stavite u tikvicu da bi lizat u potpunosti došao u kontakt sa stanicama za 3-5 min.
3. Ostružite ćelije strugačem za ćelije i sakupite ih u epruvetu za centrifugiranje.
4. Centrifugirajte na 12000 xg 5 minuta i sakupite supernatant kao ukupni rastvor proteina.
Za uzorke suspendiranih ćelija:
1. Ćelije su sakupljene centrifugiranjem.
2. Pomiješajte citosol sa IP lizatom u omjeru od 250 μL lizata po ćelijskoj jažici 6-ploče i protresite.
3. Ledeno kupatilo u trajanju od 30 minuta, više puta pipetiranje svakih 10 minuta da bi se osigurala potpuna liza ćelija.
4. Centrifugirajte na 12000 xg 5 minuta i sakupite supernatant kao ukupni rastvor proteina.
Za uzorke bakterija ili gljivica:
1. 1 mL bakterijske suspenzije je centrifugiran da bi se uklonio supernatant i jednom ispran PBS-om da bi se u potpunosti uklonila tečnost. Vrtlozi čine da se taliji što više raspršuju.
2. Dodajte 100-200 μL IP lizata i lagano promiješajte da se dobro pomiješa sa lizatom.
3. Ledeno kupatilo u trajanju od 10 minuta, više puta pipetiranje svake 2 minute kako bi se osigurala potpuna liza talisa.
4. Centrifugirajte na 12000 xg 5 minuta i sakupite supernatant kao ukupni rastvor proteina.
Napomena
1. Tkivo ili ćelije mogu izgledati viskozno kada se liziraju. To se može postići uzastopnim duvanjem pipetom ili mućkanjem vortexerom dok ne postane tečnost. Dodajte dodatnu odgovarajuću količinu rastvora za lizu ako ostane gust.
2. Ovaj reagens ne sadrži inhibitore proteaze, dodajte svoje inhibitore proteaze prije upotrebe. Preporučuju se G2006, G2007, G2008 i drugi srodni inhibitori proteaze naše kompanije.
3. Ukupna proteinska otopina dobivena cijepanjem ovog proizvoda je kompatibilna sa kompletom za kvantitativno detekciju BCA proteina (G2026) naše kompanije.
4. Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite zaštitne naočale, rukavice ili zaštitnu odjeću.
Samo za istraživačku upotrebu!
Popularni tagovi: ip lysis pufer, Kina ip lysis pufer proizvođač, dobavljač, tvornica
