Coomassie Brilliant Blue G250

Coomassie Brilliant Blue G250 može brzo vezati proteine. Maksimalna apsorpcija Coomassie Brilliant Blue G250 je 488 nm u slobodnom stanju. Nakon vezivanja za protein, maksimalna apsorpcija se promijenila na 595 nm. Vrijednost optičke apsorpcije je proporcionalna sadržaju proteina, tako da se može koristiti za kvantitativnu detekciju proteina. Ovaj proizvod se također može koristiti kao dodatak kompletu za kvantitativno otkrivanje proteina G2001 Bradford Assay.

Slanje i skladištenje na sobnoj temperaturi, rok trajanja 12 meseci.

1. (Opciono) Crtanje standardne krive (metoda čitača mikroploče): otopiti BSA u vodi da pripremite 0.5 mg/mL standardne radne otopine proteina. Standardna radna otopina proteina se dodaje na ploču 96-jažice na nivoima od 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μL, a zatim gradijent radi otopina se dopuni do 20 μL sa PBS ili fiziološkom otopinom. Krive gradijenta koncentracije proteina su 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 i 500 ug/mL. Ako se rade samo relativna kvantitativna poređenja, standardne krive nisu potrebne.

2. Pripremite uzorak za testiranje: Uzorak proteina koji se testira je razrijeđen na odgovarajući način (koncentracija proteina u uzorku može se otkriti prethodnim eksperimentom da bude unutar raspona standardne krive, kako bi se osigurala pouzdanost rezultata testa ), i 20 μL svakog uzorka se dodaje na ploču s 96-jažicom. Uzorak koji se testira treba razrijediti u istoj otopini kao i proteinski standard.

3. Detekcija: 200 μL Coomassie brilliant blue G250 otopine se dodaje u svaku jažicu i temeljno miješa (96-ploča s jažicom može se staviti na oscilator na 30 s). Nakon 3-5 min na sobnoj temperaturi, standardna kriva br. 0 se koristi kao referenca, a kolorimetrijsko mjerenje se izvodi na talasnoj dužini od 595 nm, a vrijednost apsorbancije svake jažice je zabilježena.

4. Proračun: Gradijentni sadržaj proteina (ug/mL) u standardnoj krivoj uzima se kao apscisa, a vrijednost apsorpcije svjetlosti uzima se kao ordinata za crtanje standardne krive. Prema vrijednosti apsorpcije uzorka, koncentracija proteina u uzorku koji se mjeri u odgovarajućoj jažici može se naći na standardnoj krivulji (ug/mL), a zatim se pomnožiti s razrjeđenjem uzorka, stvarna koncentracija proteina uzorak koji se meri.

5. Dodatno: ako se spektrofotometar koristi za određivanje, staklena epruveta ili staklena kolorimetrijska epruveta se koristi kao reakciona posuda za pravljenje standardnih krivulja. Nakon pravilnog razblaženja uzorka proteina koji se testira, dodajte ga u novu staklenu epruvetu ili kolorimetrijsku epruvetu veličine uzorka od 1 mL. Dodajte 3 mL Coomassie brilliant blue G250 otopine u standardnu ​​epruvetu sa gradijentom krivulje i epruvetu za uzorke, dobro promiješajte, ostavite na sobnoj temperaturi 3-5 min, a zatim koristite spektrofotometar za kolorimetrijsku detekciju.

6. Detekcija: Talasna dužina spektrofotometra je postavljena na 595 nm, a standardna kriva i uzorak koji se testiraju su nulirani sa standardnom krivom br. 0 cijevi kao referentnom. Standardne krive su nacrtane kao što je opisano u koraku 4 i izračunate su koncentracije proteina u uzorcima koji se testiraju.

1. Proizvod treba vratiti na sobnu temperaturu prije upotrebe i izmiješati naopako kako bi se izbjeglo utjecaj na osjetljivost detekcije.

2. Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite zaštitne naočale, rukavice ili zaštitnu odjeću.

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: coomassie brilliant blue g250, Kina coomassie brilliant blue g250 proizvođači, dobavljači, tvornica