Pufer za brzo blokiranje bez proteina

 

Naziv proizvoda	Cat. br.	Spec.
Pufer za brzo blokiranje bez proteina	G{0}}ML	500 mL

 

 

Ovaj proizvod je nova generacija otopine za brzo blokiranje bez proteina, mješavina različitih polimera. koji može brzo popuniti praznine na površini čvrstog nosača i smanjiti smetnje nespecifičnih signala; Ukupni efekat blokiranja je očito bolji od tradicionalnog rješenja za blokiranje na bazi BSA (goveđi serum albumin), obranog mlijeka u prahu, kazeina, itd.; Može se koristiti za blokiranje i primarno razrjeđivanje antitijela u Western blot (WB), ELISA, IHC, IF i drugim eksperimentima.

Brz i efikasan: vrijeme blokiranja je samo 5 minuta, a omjer signal-šum je jači od BSA, obranog mlijeka u prahu, kazeina i drugih tradicionalnih blokatora.

Niska pozadina: ova otopina za blokiranje ne sadrži serum, albumin i druge proteine, što osigurava visok omjer signal-šum.

Dobra kompatibilnost: Kompatibilan sa peroksidazom hrena (HRP), alkalnom fosfatazom (AP) i sekundarnim antitijelima označenim biotinom; Nema konzervansa koji utiču na aktivnost HRP i AP; ne ometa testove zasnovane na biotinu jer ne sadrži biotin.

Jednostavan za upotrebu: Ovaj proizvod sadrži TBST i može se direktno koristiti za razrjeđivanje primarnog antitijela.

 

 

Brod s mokrim ledom; Čuvati na 2-8 stepenu; Važi 12 mjeseci; Čuvati na -20 stepeni ako se ne koristi duže vrijeme.

 

 

Komponenta	G{0}}ML
Pufer za brzo blokiranje bez proteina	500 mL
Priručnici	Jedan primjerak

 

 

1. Blokiranje membrane u Western blotu

a) Perite sa TBST-om 1-2 minuta nakon završetka prijenosa;

b) U skladu sa veličinom membrane, odaberite odgovarajuću posudu, dodajte određenu količinu rastvora za brzo blokiranje bez proteina kako biste osigurali da membranu potpuno prekrijete i stavite je na klatno ili horizontalnu mućku na 5 minuta (vidi pitanje 3 za produženo zatvaranje ako se pojavi visoka pozadina);

c) Razblažite primarno antitelo rastvorom za brzo blokiranje bez proteina, pogledajte odgovarajuća uputstva za primarno antitelo za razblaženja i napravite radni rastvor primarnog antitela.

d) Nakon što je zatvaranje završeno, rastvor za zatvaranje bez proteina je izliven, ispran TBST-om 10 sekundi, i dodan je radni rastvor primarnog antitela za naknadnu inkubaciju.

Napomena: Primarna radna otopina antitijela mora u potpunosti pokriti površinu PVDF ili NC membrane; glavna funkcija pufera za brzo blokiranje bez proteina je da zatvori mjesta na PVDF ili NC membrani koja nisu vezana proteinima, kako bi se smanjila pozadina, a povećanje broja traka na izloženosti WB može ukazivati da antitijelo prepoznaje nespecifične trake i da se može zamijeniti drugim puferom za blokiranje (mlijekom ili BSA);

 

Western Blot FAQ Referentna tabela
Problemi	Mogući uzroci	Rješenja
1. Nema signala	1) Manje aktivan HRP na PVDF ili NC membranama 2) Neusklađenost između primarnih i sekundarnih izvora antitijela 3) Primarno antitelo ne prepoznaje ciljni antigen ili ima nisku snagu 4) Prenos membrane nije uspeo	1) Sekundarna inkubacija ECL ili produžena inkubacija ECL sa membranom 2) Prebacite se na ultra osjetljivu ECL ekspoziciju 3) Povećajte veličinu uzorka 4) Povećajte koncentraciju primarnog antitijela ili prijeđite na jače primarno antitijelo i postavite pozitivnu kontrolu kako biste osigurali da antitijelo prepoznaje antigen 5) Odredite izvor primarnih vrsta antitijela i odaberite odgovarajuće sekundarno antitijelo 6) Preporučuje se za elektroforezu i membranski prijenos s proteinskim markerom kako bi se osigurala pravilna elektroforeza i prijenos membrane
2. Brza degradacija signala	1) Pogoršanje ECL 2) Previše aktivnog HRP-a na PVDF ili NC membranama	1) Zamijenite novom serijom ECL 2) Smanjite volumen uzorka 3) Smanjiti koncentraciju primarnog antitela 4) Smanjite koncentraciju sekundarnih antitijela
3. Visoka pozadina	1) Unakrsna reaktivnost zaptivača sa srodnim reagensima 2) nepotpuno eluiranje 3) Predugo vrijeme ekspozicije 4) Neadekvatno blokiranje	1) Prebacite se na pufer za brzo blokiranje bez proteina 2) Produžite vrijeme eluiranja na odgovarajući način posebno za 0.22 µm PVDF membrane 3) Skratite vreme ekspozicije ili pređite na manje osetljiv ECL 4) Produžite vrijeme blokiranja
4. Smeđe/žute trake ili trake koje su anti-bijele (duh trake)	1) Previše aktivnog HRP-a na PVDF ili NC membranama, oksidativno inaktivirani dio akumulira se u velikim količinama i postaje vidljiv kao smeđa/žuta traka	1) Smanjite volumen uzorka 2) Smanjiti koncentraciju primarnog antitijela 3) Smanjite koncentraciju sekundarnih antitijela
5. Nespecifična traka	1) Vezano za antitela, generalno manje nespecifične trake za monoklonska antitela u poređenju sa poliklonskim antitelima 2) Degradacija uzorka	1) Odaberite antitelo sa dobrom specifičnošću i visokom potencijom 2) Ponovo uzmite sveže uzorke
6. Prisustvo nevidljivih bijelih mrlja unutar traka	1) Mjehurići između filter papira i koloida, koloida i membrane, te membrane i filter papira prilikom prijenosa membrane	1) Prilikom prijenosa membrane, obavezno uklonite mjehuriće između filter papira i koloida, koloida i membrane, te membrane i filter papira
7. Deformacija trake	1) Nehomogenost gela unutar gela tokom proizvodnje gela 2) Deformacija koloida zbog visoke temperature tokom elektroforeze 3) Deformacija koloida zbog visoke temperature tokom transfera 4) Prekomjerno zatezanje stezaljki tokom prijenosa dovodi do deformacije koloidne ekstruzije	1) Proizvodnja gela kako bi se osigurala homogenost gela, posebno ravnost na granici između gornjeg i donjeg sloja gela 2) Elektroforeza sa nižim naponom za smanjenje proizvodnje toplote ili elektroforeza u ledenom kupatilu 3) Za prijenos membrane potrebno je puno ledeno kupatilo 4) Obujmice ne bi trebale biti previše zategnute ili previše labave prilikom prijenosa kako bi se osiguralo da postoji određena količina pritiska

 

2. Blokiranje supstrata u ELISA eksperimentu

a) Koristite ELISA ploče za oblaganje antigena ili antitijela

b) Dodajte 300 μL rastvora za brzo blokiranje bez proteina po jažici i inkubirajte na 37 stepeni 5 minuta;

c) Nastavite sa sljedećim koracima kao što je pranje ili mućkanje prema zahtjevima ELISA.

3. blokiranje u IHC i IF eksperimentima

a) Ovaj reagens se koristi kao rastvarač za rastvaranje 3% (odnos mase i zapremine) BSA u IHC i IF eksperimentima. Ima stabilne performanse zaptivanja i odličan efekat zaptivanja u različitim tkivima u poređenju sa BSA rastvorenim u PBS; Za antitijela sa dobrom specifičnošću, ovaj reagens se može direktno koristiti kao blokator.

b) Dodajte brzo blokirajuće sredstvo bez proteina ili brzo blokirajuće sredstvo bez proteina otopljenog BSA nakon pripreme preseka tkiva i ostavite 30 minuta na sobnoj temperaturi (sa diferencijacijom tkiva); Morate potpuno pokriti uzorak kako biste izbjegli visoku pozadinu od sušenja uzorka.

 

 

1. Nijedan blokator se ne može primijeniti na sve sisteme za detekciju antigena i antitijela. Ako su antitijela neprikladna za ovaj reagens, zamijenite drugim blokatorima kao što su BSA ili obrano mlijeko u prahu.

2. Čuvajte preostalu otopinu na 2-8 stepenu kako biste izbjegli zagađenje nakon upotrebe.

3. Ovaj reagens je viskozan i treba ga pipetirati polako da bi se osigurala tačnost zapremine.

4. Ovaj proizvod se preporučuje da se koristi samo jednom, a ponovljena upotreba može dovesti do smanjenja efekta blokiranja; Za antitijela sa dobrom specifičnošću i visokim odnosom signal-šum, rješenje za blokiranje može se ponovo koristiti; Nemojte miješati oporavljeno s neiskorištenim otopinom za blokiranje.

5. Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite zaštitne naočale, rukavice ili zaštitnu odjeću.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: pufer za brzo blokiranje bez proteina, proizvođači, dobavljači, fabrika, Kina bez proteina za brzo blokiranje pufera