Komplet za bojenje TRAP

Kisela fosfataza otporna na tartrat (TRAP) je karakteristični enzim osteoklasta, koji je specifično raspoređen u osteoklastima. Komplet za bojenje TRAP koristi se za vizualizaciju osteoklasta u tkivima. Osnovni princip je da u kiselim uslovima koji sadrže vinsku kiselinu, anti-tartarna kiselina fosfataza TRAP može hidrolizirati naftol AS-BI fosfat, a nastali naftol AS-BI se vezuje za heksaazol-pararosanilin kako bi formirao bordo supstancu koja nije rastvorljiva u vodi. enzimsko aktivirano mjesto in situ, koje ostvaruje kromatografiju i lokalizaciju fosfataza protiv vinske kiseline.

Osnovne komponente proizvoda: glavne komponente reakcionog pufera su pufer sirćetne kiseline i kalijum natrijum tartarat, pH oko 5.0; otopina pararosanilina, koja sadrži pararosanilin; glavna komponenta rastvora natrijum nitrita je 4% natrijum nitrita; Rastvor AS-BI fosfatnog supstrata, glavna komponenta je 20 mg/mL naftol AS-BI fosfata. Nakon bojenja ovim proizvodom, TRAP u osteoklastima je bio bordo i lokaliziran u citoplazmi. Prema količini od 300 μL po tački tkiva na krišku, komplet može napraviti više od 50 TRAP bojenja.

Prijevoz mokrim ledom; Čuvajte na 2-8 stepenu i izbjegavajte svjetlost, u kojoj je AS-BI otopina fosfatnog supstrata pohranjena na -20 stepenu, važi 12 mjeseci.

Pripremite TRAP radnu tečnost:

(1) Uzmite 50 μL rastvora pararosanilina (G1050-2) i 50 μL rastvora natrijum nitrita (G1050-3) i pomešajte ih u čistoj epruveti za centrifugiranje da dobijete rastvor heksaazol-pararosanilina;

(2) Dodajte 100 μL rastvora AS-BI fosfatnog supstrata (G1050-4) u 100 μL rastvora heksaazol-pararosanilina u koraku 1, duvajte i aspirirajte nekoliko puta do kraja;

(3) Apsorbujte 1,8 mL reakcionog pufera (G1050-1) i dodajte ga u rastvor mešavine u koraku 2 i temeljno promešajte;

(4) Pomiješana tečnost u koraku 3 se filtrira kroz igličasti filter (0.45 μm mlazni filter film) da se dobije radna tečnost TRAP.

Napomena: Obavezno pripremite radni rastvor onim redosledom kojem pripada.Za svaku tačku tkiva potrebno je oko 200-300 μL radne otopine, koju treba pripremiti prema upotrijebljenoj količini i koristiti po potrebi kako bi se izbjegao gubitak.

1. Parafinski dijelovi se devoskaju u vodu i peru u čistoj vodi nekoliko minuta.

2. Stavite sekcije u krug hemijske olovke za tkivo (sa određenom količinom čiste vode kako biste sprečili sušenje sekcija) u vlažnu kutiju i inkubirajte sekcije sa čistom vodom na 37 stepeni 2 h.

3. Nakon što se sekcija inkubira, izlijte čistu vodu, dodajte filtrirani radni rastvor TRAP-a da pokrijete tkivo i stavite ga na 37 stepeni u mrak na 20-30 min.

4. (Opciono, pripremite vlastite reagense) Protivbojite jezgre: sipajte rastvor za inkubaciju i isperite ga rastvorom hematoksilinske boje da biste obojili jezgra.

5. Dehidrirajte, prozirite i zapečatite neutralnom gumom.

1. Fiksacija ćelije: uklonite medij ćelijske kulture usisavanjem, dodajte 4% paraformaldehida (Preporučuje se G1101) i fiksirajte 15-30 min, a zatim isperite destilovanom vodom 3 puta.

2. Ruptura ćelijske membrane: Ćelije su prekrivene 0.2% Triton X-100 otopinom 20-30 min i nježno isprane destilovanom vodom 3 puta.

3. Inkubacija i bojenje: TRAP radni rastvor je dodat na ploču sa ćelijskom jažicom da pokrije ćelije, a ćelije su inkubirane na 37 stepeni 15-20 min u mraku, i isprane destilovanom vodom 3 puta.

4. (Opciono, pripremite vlastite reagense) Nuklearna boja: Ubrišite otopinu za inkubaciju i isperite je otopinom za bojenje hematoksilinom za nuklearno bojenje.

5. Dodajte odgovarajuću količinu apsolutnog etanola za dehidraciju, izvadite pokrivno staklo u pločicu za bunar, osušite ga fenom i zapečatite naopako na čistom staklenom predmetu neutralnom gumom.

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: komplet za bojenje zamke, proizvođači, dobavljači, fabrika zamke za bojenje u Kini