FFPE komplet za ekstrakciju genomske DNK

 

Naziv proizvoda	Kat.br.	Spec.
FFPE komplet za ekstrakciju genomske DNK	G3635-50T	50 T

 

 

Komplet je pogodan za ekstrakciju genomske DNK iz formalin fiksiranog i tkiva ugrađenog u parafin (FFPE), koristeći poseban reagens za deparafinaciju, bez ksilena i drugih organskih rastvarača, siguran i netoksičan, može efikasno ukloniti parafin i osloboditi uzorke tkiva. Komplet može brzo i efikasno ekstrahovati genomsku DNK iz tkiva ugrađenih u parafin korišćenjem specijalnog pufera za lizu u kombinaciji sa metodom centrifugirane kolone. Proces ekstrakcije se može završiti u roku od 1 sata, a DNK ima visok prinos, visoku čistoću i integritet, tako da je pogodna za razne nizvodne eksperimente molekularne biologije, kao što su PCR, PCR u realnom vremenu, SNP genotipizacija i drugi eksperimenti molekularne biologije .

 

 

RNaza A i Proteinaza K se isporučuju sa mokrim ledom i čuvaju na -20 stepenu. Ostali reagensi se šalju i čuvaju na sobnoj temperaturi; važi 12 meseci.

 

 

Component Number	Komponenta	G3635-50T
G3635-1	Buffer DP	30 mL
G3635-2	Buffer GL	10 mL
G3635-3	Proteinaza K	1 mL
G3635-4	RNase A	500 μL
G3635-5	Buffer GB	10 mL
G3635-6	Buffer GP	9 mL (21 mL bezvodnog etanola potrebno je prije upotrebe)
G3635-7	Buffer PW	24 mL (56 mL bezvodnog etanola potrebno je prije upotrebe)
G3635-8	Buffer TE	10 mL
G3635-9	DNK Spin Columns	50
Manual		Jedan primjerak

 

 

1. Pripremite vodene ili metalne kupke na 80 stepeni, 56 stepeni i 90 stepeni unapred.

2. Ako se pufer GL i pufer GB talože, zagrejte na 65 stepeni da se rastvori i upotrebite ga nakon što se vratite na sobnu temperaturu.

3. Molimo dodajte 21 mL bezvodnog etanola u pufer GP i 56 mL bezvodnog etanola u pufer PW prije prve upotrebe, dobro promiješajte i zatim koristite.

 

 

1. Priprema uzoraka:

a. Parafinski rezovi: ostružite 5~8 parafinskih sekcija (veličine 1×1 cm2) sterilizovanim skalpelom i sakupite fragmente tkiva i stavite ih u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL.

b. Parafinski blokovi: ostružite uzorak tkiva od oko 30 mg steriliziranim skalpelom, uklonite višak parafina što je više moguće i izrežite uzorak.

c. Uzorak tkiva natopljen formalinom: osušite tečnost na površini uzorka filter papirom, uzmite oko 30 mg uzorka, izrežite ga i stavite u epruvetu za centrifugu od 1,5 mL, dodajte 500 μL PBS pufera (pH 7,4), vrtložna oscilacija 10 s , zatim centrifugirajte na 12,000 o/min 1 min na sobnoj temperaturi, bacite supernatant, ponovite 3 puta.

2. Prenesite uzorak u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL, dodajte 500 μL pufera DP, inkubirajte na 80 stepeni 3 minute i vorteks oscilirajte 10 s dok je uzorak vruć.

3. Dodajte 200 μL pufera GL u epruvetu za centrifugiranje, dobro promiješajte sa vorteksom, centrifugirajte na 12,000 o/min 1 min na sobnoj temperaturi i formirajte dva sloja otopine (gornji sloj je uljna faza, donji sloj je vodena faza).

4. Dodajte 20 μL proteinaze K i 10 μL RNaze A u donju vodenu fazu, lagano pomiješajte pipetom (pokušajte da ne uništite stratifikaciju), inkubirajte na 56 stepeni 20 min.

5. Zatim prebacite epruvetu za centrifugiranje u blok za grijanje od 90 stepeni, inkubirajte 10 minuta (ako ima više blokova tkiva koji nisu u potpunosti svareni, vrijeme inkubacije se može odgovarajuće produžiti na 20 minuta) i ohladiti na sobnu temperaturu.

6. Dodajte 200 μL pufera GB i 200 μL bezvodnog etanola uzorku u prethodnom koraku i dobro promiješajte vrtložnim oscilacijom.

7. Centrifugirajte na 12,000 o/min 1 min, i formirajte dva sloja rastvora (gornji sloj je uljna faza, donji sloj je vodena faza).

8. Uklonite vodeni rastvor iz donjeg sloja u DNK spin kolonu (nemojte da dobijete rastvor gornje uljne faze i druge nečistoće). Centrifugirajte na 12,000 o/min 2 min na sobnoj temperaturi i odbacite filtrat.

9. Dodajte 500 μL pufera GP u DNK spin kolonu, centrifugirajte na 12,000 rpm 1 min na sobnoj temperaturi, a zatim bacite filtrat.

10. Dodajte 600 μL pufera PW u DNK spin kolonu (molimo dodajte pufer PW duž zida cijevi kako biste isprali zaostalu sol sa zida cijevi), centrifugirajte na 12,000 o/min 1 min na sobnoj temperaturi i bacite filtrat.

11. Ponovite korak 10.

12. Stavite DNK spin kolonu na epruvetu za sakupljanje, centrifugirajte na 12,000 o/min 2 min. Prenesite Spin Column u novu epruvetu za centrifugiranje bez nukleaza od 1,5 mL.

13. Otvorite poklopac DNK spin kolone, ostavite je na sobnoj temperaturi 3~5 minuta kako bi etanol potpuno ispario.

14. Dodajte 50~100 μL pufera TE ili vode bez nukleaza zagrejanu na 65 stepeni u centar membrane DNK spin kolone, ostavite na sobnoj temperaturi 5 min. Centrifugirajte na 12,{7}} o/min 2 min da prikupite DNK. Da biste dobili veću koncentraciju DNK, također možete dodati prvi eluent natrag u DNK spin kolonu, zatim stajati na sobnoj temperaturi 5 minuta i centrifugirati na 12,{11}} o/min 2 minute da ponovo eluirate DNK.

 

 

1. Molimo pažljivo pročitajte priručnik proizvoda prije upotrebe.

2. Prinos i integritet DNK ekstrahirane ovim kompletom zavise od tipa uzorka, fiksnog vremena, fiksnog stanja i vremena skladištenja uzorka. Poželjno je da je fiksno vrijeme unutar 8-24 sata. Ako je fiksno vrijeme uzorka duže od 24 sata ili je vrijeme skladištenja duže od 1 godine, DNK će biti previše fragmentirana i ciljna traka se ne može pojačati.

3. Uzorke treba potpuno dehidrirati prije ugradnje kako bi se spriječilo da rezidualni formalin utječe na naknadne eksperimente.

4. Prilikom uzorkovanja ugrađenog tkiva, potrebno je ukloniti višak parafina i izrezati uzorak što je više moguće, a količina uzorkovanja ne smije biti veća od 30 mg, inače je lako izazvati nedovoljnu lizu i utjecati na prinos nukleinske kiseline.

5. Kada se ekstrahovana genomska DNK koristi kao šablon za PCR amplifikaciju, predlaže se da se prvo uradi test gradijenta šablona i da se izabere najbolja koncentracija šablona za amplifikaciju.

6. Nosite laboratorijski mantil i jednokratne rukavice kada radite.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: ffpe komplet za ekstrakciju genomske DNK, Kina ffpe komplet za ekstrakciju genomske DNK proizvođači, dobavljači, tvornica