Komplet za detekciju mikoplazme (PCR)

Kontaminacija mikoplazmom će izazvati štetne efekte na sve aspekte ćelija i postala je visoko cijenjen problem u ćelijskoj kulturi. Stoga je vrlo neophodno redovno otkrivati ​​kontaminaciju mikoplazmom. Ovaj komplet za detekciju mikoplazme koristi PCR metodu za specifično otkrivanje kontaminacije mikoplazmom u različitim kultivisanim biološkim materijalima ćelija (kao što su kulture ćelija, izlučevine eksperimentalnih životinja, životinjski serum, itd.). Mešani prajmeri koji se koriste u kompletu su specifični prajmeri dizajnirani za očuvani region 16S rRNA sekvence mikoplazme. Specifična PCR amplifikacija DNK Mycoplasma može se završiti u roku od jednog sata sa odgovarajućom Mycoplasma PCR mješavinom (2×) koristeći otopinu ćelijske kulture kao PCR šablon. Ovaj komplet ima visoku osjetljivost i može otkriti samo 20 kopija mikoplazme.

Brod s mokrim ledom; Čuva se na -20 stepenu, važi 12 mjeseci.

1. Pripremite uzorak: Odgovarajuća količina supernatanta ćelijske kulture za testiranje uzeta je u čistu PCR epruvetu. Ove PCR epruvete su termički obrađene na 95 stepeni tokom 5 minuta u PCR instrumentu i korišćene kao šablon. Uzorci seruma se mogu razrijediti vodom bez mikoplazme, a odgovarajući uzorci su stavljeni u čistu PCR epruvetu. Ove PCR epruvete su termički obrađene na 95 stepeni tokom 5 minuta u PCR instrumentu i korišćene kao šablon. ;

2. Pripremite PCR reakcije: Negativna kontrola (zamijenite 1 μL uzorka sa istom količinom vode bez mikoplazme) i pozitivna kontrola (dodajte 0.5 μL pozitivne kontrole na 1 μL uzorka kao predložak) će se postaviti za svaki eksperiment. Nosite maske i rukavice za jednokratnu upotrebu tokom eksperimenta i radite s oprezom kako biste spriječili nepravilno unošenje egzogene kontaminacije mikoplazmom;

3. Podešavanje PCR programa:

4. Gel elektroforeza: Uzmite 10 μL PCR proizvoda i koristite 1% agarozni gel za detekciju elektroforeze.

5. Analizirati rezultate: U svakom eksperimentu, kontaminaciju uzoraka mikoplazmom upoređujući sa rezultatima negativne kontrole i pozitivne kontrole. Pozitivna veličina trake bila je oko 500 bp. Ako postoje trake u rezultatima negativnih kontrolnih testova, vjerovatno je kontaminacija u PCR sistemu i predlaže se da se rezultati ponovo potvrde. Ako je potrebno, PCR proizvodi se također mogu rutinski sekvencirati kako bi se identificirale specifične vrste mikoplazme.

1. Ovaj komplet može otkriti M. orale,M. arginini,M. bovis,M. fermentans,M. gallisepticum,M. hominis,M. pirum, Ureaplasma spp, M. hyorhinis,M. pneumoniae,A. laidlawii i drugih najmanje 11 vrsta kontaminacije mikoplazmom.

2. Sve reagense treba odmrznuti i dobro izmiješati na ledu prije upotrebe, te čuvati na -20 stepeni nakon upotrebe.

3. Negativne kontrole i pozitivne kontrole moraju se postaviti za svaki eksperiment, a eksperimentalna grupa preporučuje postavljanje gradijenta uzorka šablona.

4. Tokom operacije se moraju nositi maske, a standardi PCR operacije moraju se striktno poštovati kako bi se spriječilo da unošenje egzogenog zagađenja utječe na eksperimentalne rezultate.

5. Kako bi se osigurala pouzdanost i stabilnost ćelijskih eksperimenata, preporučuje se da se kontaminacija mikoplazmom redovno otkriva.

6. Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite laboratorijski mantil i jednokratne rukavice.

Samo za istraživačku upotrebu!

Popularni tagovi: komplet za detekciju mikoplazme (pcr), Kina komplet za detekciju mikoplazme (pcr) proizvođači, dobavljači, tvornica