BCECF, AM Fluorescencijski PH komplet

 

Naziv proizvoda	Cat.br.	Spec..
BCECF, AM fluorescentni pH test kit	G1726-100T	100 T

 

 

Intracelularni pH igra važnu ulogu u mnogim ćelijskim aktivnostima, kao što su rast ćelije, aktivnost enzima, transport jona i drugi procesi. BCECF, AM je ćelijski permeabilna pH fluorescentna boja koja se široko koristi za praćenje promena unutarćelijskog pH kontrastom odnos talasnih dužina dvostruke pobude. BCECF, AM nije fluorescentan i može se razdvojiti u BCECF od strane intracelularnih esteraza po ulasku u ćeliju, čime se zadržava unutar ćelije. BCECF, AM se široko koristi ne samo u ćelijama sisara, već je također prijavljeno da se koristi za intracelularne pH nivoe u životinjskim tkivima, biljnim ćelijama, bakterijama i kvascima.

Ovaj komplet je baziran na gore navedenom principu detekcije, sa BCECF, AM kao glavnim tijelom, i pruža specijalizirani bafer za podudaranje, koji je jednostavan za korištenje i osjetljiviji za otkrivanje. Može se koristiti za praćenje dinamičke promjene intracelularnog pH pomoću fluorescentnog mikroskopa, instrumenta za označavanje enzima i drugih odgovarajućih instrumenata.

 

 

Prevozi se na suhom ledu; uskladišteno na suhom i zaštićenom od svjetlosti na -20 stepenu. Vrijedi 12 mjeseci.

 

 

KomponentaBroj	Komponenta	G1726-100T
G1726-1	BCECF, AM fluorescentna sonda	20 μL
G1726-2	pH pufer za testiranje	20 mL
Manual		1 kom

Napomena: Gorenavedena vremena reakcije kompleta odgovaraju 96-sistemu za analizu ploča sa bunarima.

 

 

1. Predeksperimentalne pripreme:Ćelije su unaprijed inokulirane u 96-ploče sa jažicom određene gustine, a ćelije su prethodno tretirane u skladu sa svrhom eksperimenta;

 

2. BCECF, priprema radne otopine za analizu AM:prema potrebi pripremeBCECF, AM test radno rješenje, sistem pripreme može se uputiti na sljedeću tabelu, imajte na umu da su različite karakteristike ćelija različite, prema stvarnoj situaciji eksperimenta može se dodati ili smanjiti koncentracija sonde koja se koristi, početna preporuka omjera razrjeđenja od 1: 500;

 

	1 uzorak	10 uzoraka	100 uzoraka
BCECF, AM fluorescentna sonda	0.2 μL	2 μL	20 μL
pH bafer za testiranje	100 μL	1 mL	10 mL

 

3. Markeri za bojenje(u slučaju adherentnih ćelija; ćelije suspenzije se moraju centrifugirati i mijenjati svaki put):

3.1 Uklonite originalni medijum za ćelijsku kulturu i isperite ćelije 1-2 puta sa PBS ili drugim puferima;

3.2 Uklonite pufer za ispiranje, dodajte 100 μL BCECF, AM radnog rastvora za analizu u svaku jažicu i inkubirajte 30 minuta na 37 stepeni u inkubatoru ćelijske kulture zaštićenom od svetlosti;

3.3 Na kraju inkubacije uklonite radnu otopinu BCECF, AM testa i isperite ćelije 2-3 puta koristeći PBS ili druge pufere;

Napomena: Isperite radni rastvor BCECF, AM testa.

Dodano je 3.4 100 μL pufera za detekciju fluorescencije.

4. pH kalibracija(pH kalibracija metodom nigericina kao primjer, opciono):

4.1 Pripremite pufere različitog pH (npr. 6.6, 7.0, 7.2, 7.4, 7.8, 8.2) unaprijed;

4.2 Nakon bojenja i obeležavanja, dodani su puferi različitog pH kao i nigericin (konačna koncentracija od 10 ug/mL), a intenzitet fluorescencije je meren nakon 10 minuta inkubacije na 37 stepeni u ćelijskom inkubatoru zaštićenom od svetlosti;

4.3 Grafički prikaz grafika intenziteta fluorescencije u odnosu na pH za izračunavanje pH uzorka.

Napomena: Metoda nigericina za kalibraciju pH je samo za referencu, možete odabrati odgovarajuću metodu prema vašim eksperimentalnim potrebama. Općenito, što je veći omjer intenziteta fluorescencije, to je viši pH.

5. Fluorescencijski test:Intracelularni pH nivo se detektuje i analizira korišćenjem enzimskog markera i drugih srodnih instrumenata. Obično se BCECF, AM primjenjuje na omjer dvostruke pobude: EX/EM=490/530 nm : EX/EM=440/530 nm.

 

 

1. Zbog različitih međućelijskih svojstava i predtretmana, udio korištenih sondi i raspon vremena inkubacije opisan u koracima su samo za referencu i mogu se prilagoditi od slučaja do slučaja.

2. Fluorescentne boje su podložne gašenju, stoga pokušajte izbjegavati svjetlost kako biste usporili fluorescenciju.

3. BCECF, AM je vrlo osjetljiv na vlagu, kada ga koristite po prvi put, podijelite ga na odgovarajući način prema eksperimentalnom rasporedu i izbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje. BCECF, AM radni rastvor za analizu treba pripremiti i koristiti sada.

4. Dobro protresti prije upotrebe kako bi se osiguralo potpuno otapanje.

5. Na osnovu principa rada ove sonde, ćelije se ne mogu fiksirati ili perforirati.

6. Radi vašeg zdravlja i sigurnosti, nosite laboratorijski mantil i rukavice kada radite.

 

Samo za istraživačku upotrebu!

 

 

Popularni tagovi: bcecf, am set za fluorescentni ph test, Kina bcecf, am proizvođači kompleta za fluorescentni ph test, dobavljači, tvornica