Informacije o proizvodu
|
Naziv proizvoda |
Cat. br. |
Spec. |
|
Medij za odvajanje limfocita (pacov, miš) |
G{0}}ML |
100 mL |
Opis proizvoda/Uvod
Ovaj proizvod je rastvor za odvajanje gradijenta gustine pogodan za odvajanje limfocita periferne krvi pacova i miševa. Njegov princip se uglavnom zasniva na razlici u gustini između različitih ćelija periferne krvi (gustina crvenih krvnih zrnaca i granulocita je oko 1.090 g/mL; trombocita je 1.030-1.035 g/ mL Limfociti i monociti su 1.075-1.090 g/mL) i odvojeni su od periferne krvi gustinom gradijenta; centrifugiranje. Ovaj proizvod je sterilan rastvor za razdvajanje sa niskim nivoom endotoksina, spreman za upotrebu, sa gustinom od 1,083 ± 0,001 g/mL (20 stepeni). Gustoća limfocita glodavaca je nešto veća od gustine ljudskih limfocita, a izolacija periferne krvi miševa je sklona hemolizi. Na osnovu ovih karakteristika, proizvod je optimizovan na bazi tradicionalnog Ficoll-meglumina za održavanje stabilnosti rastvora za separaciju duže vreme nakon dodavanja krvi, a operacija je jednostavna i izolovani limfociti su visoke čistoće i dobrog stanja.
Uslovi skladištenja i otpreme
Brod s mokrim ledom; Čuvati na mraku na 2-8 stepeni, važi 12 mjeseci.
Komponente proizvoda
|
Komponenta |
G{0}}ML |
|
Medij za odvajanje limfocita (pacov, miš) |
100 mL |
|
Manual |
1 kom |
Protokol/procedure proizvoda
Za odvajanje 1 mL limfocita iz periferne krvi miša, omjer volumena krvi i medija za odvajanje limfocita je 1:1-1:2, uz odgovarajuća podešavanja unutar ovog raspona; Prilikom odabira epruvete za centrifugiranje treba paziti da ukupni volumen medija za odvajanje krvi i limfocita ne prelazi dvije trećine volumena epruvete.
1. Uzmite 1 mL svježeg antikoagulansa pune krvi (mogu se koristiti heparin, EDTA, natrijum citrat i drugi antikoagulansi), razrijediti sa jednakom količinom PBS-a (preporučuje se G4202) ili Hanksovog pufera (preporučuje se g4203) ne sadrži kalcij i magnezij za dobijanje 2 mL razrijeđene pune krvi.
2. Odpipetirajte 3 mL otopine za izolaciju limfocita iz periferne krvi iz pacova i miševa u sterilnu epruvetu za centrifugiranje od 15 mL (preporučuje se EP-1500-J).
3. Nagnite epruvetu za centrifugu na 45 stepeni i polako dodajte 2 mL razblažene krvi duž zida epruvete u epruvetu za centrifugu, tako da krv leži ravno na gornjem sloju medijuma za odvajanje limfocita periferne krvi pacova i miševa.
4. Preporučljivo je koristiti centrifugu s horizontalnom glavom, staviti epruvetu u adapter horizontalne glave, smanjiti brzinu centrifuge (3-5 brzine su odgovarajuće) i centrifugirati na 800 xg 25 minuta na sobnoj temperaturi.
5. Nakon centrifugiranja, epruveta se lagano drži na nosaču epruveta i primećuje se jasna stratifikacija: najgornji sloj je sloj plazme; gornji srednji sloj je sloj limfocita; donji srednji sloj je medij za odvajanje limfocita; a najniži sloj je sloj eritrocita i granulocita (pogledajte priloženu sliku).
6. Uklonite gornji sloj plazme i pažljivo aspirirajte sloj tunica albuginea (limfocitni sloj) u novu sterilnu epruvetu za centrifugiranje.
7. Isperite sa 8 mL PBS (preporučeno G4202) ili drugim puferom, centrifugirajte na 100 xg 10 minuta, a zatim bacite supernatant.
8. Ponovite korak 7 (opciono).
9. Resuspenzija limfocita u potrebnom mediju ili puferu u skladu sa svrhom eksperimenta.
Napomena
1. Proizvod mora biti u potpunosti izbalansiran i pomiješan naopačke na sobnoj temperaturi prije upotrebe. Odgovarajuća temperatura za odvajanje je 18-25 stepen.
2. Da bi se održala aktivnost limfocita, najbolje je odabrati svježu antikoagulacijsku krv u roku od 2 sata od uzimanja krvi; Ako je potrebna dalja kultura i ispitivanje izolovanih limfocita, obratite pažnju na aseptičnu operaciju tokom uzimanja i odvajanja krvi.
3. Razrjeđivanje ili pranje pufera, nemojte koristiti pufer koji sadrži ione kalcija i magnezija kako biste izbjegli agregaciju krvnih stanica.
4. Prekomjerna apsorpcija komponenti izvan sloja limfocita tunica albuginea će uzrokovati miješanje nekih granulocita ili trombocita na spoju.
5. Razlike između uzoraka krvi mogu uticati na rezultate odvajanja. Centrifugalna sila i vrijeme mogu se podesiti na odgovarajući način prema stvarnoj situaciji. Referentna centrifugalna sila i vremenski raspon su 500-1000 g i 20-30 min.
6. Normalno je da se crvena krvna zrnca talože nakon miješanja medija za odvajanje krvi i limfocita određeno vrijeme.
7. Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite zaštitne naočale, rukavice ili zaštitnu odjeću.
Prilog: Šematski dijagram svakog sloja prije i poslije odvajanja
Ovaj proizvod je samo u svrhu znanstvenog istraživanja, a ne za kliničku dijagnozu!
Popularni tagovi: Medij za odvajanje limfocita (pacov, miš), proizvođači, dobavljači, tvornica u Kini medijum za odvajanje limfocita (štakor, miš)
